凝膠過(guò)濾層析是依據(jù)生物分子體積大小差異來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的層析方法，也稱為分子篩層析及體積排阻層析。凝膠過(guò)濾介質(zhì)是一類具有不同孔徑大小分布的三維網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)球形介質(zhì)，不同體積大小的生物分子在流經(jīng)凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)時(shí)，因介質(zhì)孔徑大小與分布不同，使不同大小的生物分子產(chǎn)生不同的柱程與保留時(shí)間，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)不同大小生物分子的分離。
凝膠過(guò)濾介質(zhì)的特點(diǎn)：
?分離原理易懂，操作簡(jiǎn)單。
?惰性介質(zhì)，非特異性吸附極低。
?分離條件溫和，目的蛋白回收率高。
?流動(dòng)相中存在的離子、小分子雜質(zhì)、去污劑等不會(huì)對(duì)分離產(chǎn)生影響。
?適用體系pH范圍廣。
凝膠過(guò)濾介質(zhì)主要應(yīng)用：
?組群分離：脫鹽/置換緩沖體系，上樣體積可達(dá)柱床體積的25-30%。
?組分分離：分離不同分子量大小的蛋白、病毒粒子、聚體去除，上樣體積一般為柱體積的1-5%，且柱床高度要求≥60cm。
凝膠過(guò)濾介質(zhì)的分類：
葡聚糖凝膠 G 系列
丙烯葡聚糖凝膠 S 系列
瓊脂糖凝膠系列
葡聚糖凝膠 G 系列
葡聚糖凝膠主要用于生物分子脫鹽，低分子蛋白，多肽，多糖的分離純化。
葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。親水基質(zhì)使其非特異性吸附最小化，并在生物分子分離期間得到較高的回收率。G 型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，因此它們的溶脹度和分級(jí)分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。
交聯(lián)度越高，凝膠孔徑越小,溶脹系數(shù)越小。通過(guò)改變交聯(lián)度來(lái)控制孔徑的變化，對(duì)特定分子大小的選擇，影響凝膠的耐壓及化學(xué)穩(wěn)定性。
Sephadex G-10 G后面的阿拉伯?dāng)?shù)為凝膠得水值的10倍。例如，G-25為每克凝膠膨脹時(shí)吸水2.5克。
葡聚糖凝膠 LH 系列
葡聚糖凝膠 LH 系列主要應(yīng)用于分離脂溶性物質(zhì)，例如膽固醇、脂肪酸激素等。
Sephadex LH-20和LH-60是Sephadex G-25和G-50中分別加入羥丙基基團(tuán)反應(yīng)形成的，球蛋白分離范圍分別為100-4000 和4000～20000。
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丙烯葡聚糖凝膠 S 系列
Sephacryl 是葡聚糖與甲叉雙丙烯酰胺交聯(lián)而成。是一種比較新型的葡聚糖凝膠。廣泛應(yīng)用于酶、多糖、核酸和蛋白質(zhì)等生物大分子的分離純化，γ-干擾素、白介素-Ⅱ、蛋白質(zhì)A和乙肝疫苗等生物制品生產(chǎn)過(guò)程中，均使用此類層析介質(zhì)。與葡聚糖凝膠相比，它的優(yōu)點(diǎn)是：
1.分離范圍更大：
排阻極限可以達(dá)到10E8。不僅可以用于分離一般蛋白，也可以用于分離蛋白多糖、質(zhì)粒、甚至較大的病毒顆粒。
2.化學(xué)和機(jī)械穩(wěn)定性更高：
在各種溶劑中很少發(fā)生溶解或降解，可以用各種去污劑、胍、脲等作為洗脫液，耐高溫，穩(wěn)定工作的pH一般為3~11。
3.機(jī)械性能更好：
可以以較高的流速洗脫，比較耐壓，分辨率也較高，可以實(shí)現(xiàn)相對(duì)比較快速而且較高分辨率的分離。
產(chǎn)品信息：
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瓊脂糖凝膠系列
主要用于病毒，病毒載體，外泌體等超大生物分子的分離純化。
瓊脂糖凝膠過(guò)濾介質(zhì)因其合成過(guò)程中瓊脂糖含量的不同會(huì)產(chǎn)生大小分布不同的膠束孔，形成不同的分子量分離效果。
Sepharose 4B和Sepharose 6B：4%和6%的瓊脂糖凝膠過(guò)濾介質(zhì)，內(nèi)部分子結(jié)構(gòu)靠氫鍵固定，耐壓性能較差。
在Sepharose 4B和 6B的基礎(chǔ)上，對(duì)其進(jìn)行低強(qiáng)度與高強(qiáng)度交聯(lián)處理，生產(chǎn)出了耐壓性能更好的交聯(lián)瓊脂糖系列，提升介質(zhì)結(jié)構(gòu)剛性，提高處理流速與耐壓性能，滿足工業(yè)規(guī)模凝膠過(guò)濾分離純化的需要。
Sepharose CL-4B、Sepharose CL-6B：高耐壓瓊脂糖系列介質(zhì)產(chǎn)品。
Sepharose4FF、Sepharose 6FF：高流速瓊脂糖系列介質(zhì)產(chǎn)品。
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