細(xì)胞STR鑒定技術(shù)服務(wù)

    研究背景

    細(xì)胞系錯(cuò)誤鑒定問題已有50年歷史，基于國際細(xì)胞庫的分析數(shù)據(jù)顯示：1984年細(xì)胞錯(cuò)誤鑒定率為35%，1999年為18%，直到最近幾年，應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的細(xì)胞系需要鑒定的問題仍然很少有人關(guān)注。

    近年來，大量研究表明 STR 基因分型 方法是進(jìn)行細(xì)胞交叉污染和性質(zhì)鑒定的最有效和準(zhǔn)確的方法之一，STR基因分型應(yīng)用于細(xì)胞鑒定已被ATCC等機(jī)構(gòu)強(qiáng)烈推薦。美國的ATCC 細(xì)胞庫、德國的DSMZ細(xì)胞庫以及日本的JCRB細(xì)胞庫等為STR 分型提供了各細(xì)胞株的數(shù)據(jù)供比對。

    技術(shù)簡介

    STR ( Short Tandem Repeat, 短串聯(lián)重復(fù)序列)基因分型技術(shù)是細(xì)胞身份鑒定最準(zhǔn)確有效的方法，被ATCC、ICLAC等權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)定為細(xì)胞鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)。STR基因位點(diǎn)由長度為3~ 7個(gè)堿基對的短串連重復(fù)序列組成，廣泛存在于人類基因組中，被稱為細(xì)胞的DNA指紋。通過對這些STR位點(diǎn)的檢測，將檢查結(jié)果與專業(yè)的STR數(shù)據(jù)庫比對，從而確定被測細(xì)胞的真實(shí)身份，或判斷被測細(xì)胞是否與某些細(xì)胞，發(fā)生交叉污染。

    人源細(xì)胞STR分型(cell line STR genotyping),是選用D19S433、D5S818、D21S11、D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、PentaD、vWA、D8S1179、TPOX、PentaE、TH01、D12S391、D2S1338和FGA等19個(gè)具有高度多態(tài)性基因座和一個(gè)性別基因位點(diǎn)Amelogenin對人源細(xì)胞進(jìn)行STR分型檢測。根據(jù)STR分型結(jié)果對細(xì)胞的生長狀態(tài)(是否存在交叉污染)和細(xì)胞的株系進(jìn)行確認(rèn)的技術(shù)手段。

    為什么需要做細(xì)胞STR鑒定

細(xì)胞系錯(cuò)誤鑒定所造成的后果

    ? 細(xì)胞系的損失

    ? 時(shí)間和金錢的損失

    ? 在公眾領(lǐng)域(文獻(xiàn)、專利等)提供錯(cuò)誤信息

    ? 造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致或不可重復(fù)

何時(shí)需做細(xì)胞STR鑒定

    ?發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費(fèi)前

    ?使用細(xì)胞進(jìn)行臨床治療(試驗(yàn))前

    ?準(zhǔn)備凍存保種或已凍存多年的細(xì)胞

    ?一個(gè)涉及到細(xì)胞試驗(yàn)項(xiàng)目開始/結(jié)束時(shí)

    ?新得到的細(xì)胞或?qū)嶒?yàn)室傳5代以上的細(xì)胞

    ?細(xì)胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大

    ?文章發(fā)表或常規(guī)定期鑒定

    周期報(bào)價(jià)

    周期：1 周

    報(bào)價(jià)：800 元/樣

    檢測流程

    1.確定STR位點(diǎn)，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，包括熒光標(biāo)記的選擇，引物的設(shè)計(jì)、合成和標(biāo)記，熒光分子量內(nèi)標(biāo)的選用等。

    2.按照所設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方案完成熒光PCR，利用瓊脂糖電泳檢測結(jié)果;若PCR產(chǎn)物特異性不夠，將進(jìn)行優(yōu)化。

    3.PCR產(chǎn)物通過ABI 3730XL測序儀器進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測，獲得擴(kuò)增片段大小的數(shù)據(jù)

    4.用GeneScan 3.0/GenoTyper 2.0或GeneMapper 3.2等軟件對收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，將產(chǎn)物片段大小、數(shù)量多少的信息轉(zhuǎn)化成直觀準(zhǔn)確的波形圖譜，為下一步進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析或連鎖分析等遺傳分析提供可靠的數(shù)據(jù)。

    服務(wù)內(nèi)容

    細(xì)胞收集，基因組DNA提取

    熒光弓|物PCR擴(kuò)增21個(gè)str位點(diǎn)

    產(chǎn)物經(jīng)測序儀電泳，獲得細(xì)胞基因分型結(jié)果

    結(jié)果與ATCC、DSMZ、JCRB和RIKEN等細(xì)胞庫比對和分析

    樣品要求

    1. PCR產(chǎn)物或基因組DNA：濃度≥200ng/ul，總體積≥20ul，OD260/280在1.7至2.0之間;新鮮組織樣品：總量≥100mg的新鮮組織樣品或1～2ml血液樣品

    2. PCR產(chǎn)物或基因組DNA請?zhí)峁悠返碾娪緳z測圖

    3. 由于在實(shí)驗(yàn)過程中，可能會出現(xiàn)某些STR位點(diǎn)難以檢測的情況，建議提供3～4個(gè)備選STR位點(diǎn)

    4. 建議使用6FAM, VIC, NED以及PET四種熒光標(biāo)記

    5. 為盡量避免多種熒光信號的相互干擾，不建議同管檢測使用的熒光多于2種，多種熒光同管檢測，PCR產(chǎn)物大小需相差50bp以上

    6. STR檢測中常會出現(xiàn)一些比正常產(chǎn)物短2～4個(gè)堿基的峰，這是由截?cái)郟CR造成的，屬于正常現(xiàn)象，并不會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析。

    您的細(xì)胞系認(rèn)證服務(wù) STR 概況報(bào)告包含

    簡單易懂的STR等位基因表

    支持每個(gè)位點(diǎn)的等位基因調(diào)用的電泳圖

    結(jié)果的綜合解釋

    STR 分型圖譜和細(xì)胞鑒定結(jié)果的書面報(bào)告 (中英文報(bào)告)

    公司優(yōu)勢

    通用熒光引物，大幅降低3730實(shí)驗(yàn)成本

    提供21個(gè)str位點(diǎn)選擇，極大提高鑒定的分辨率

    數(shù)據(jù)分析基于3730測序平臺，結(jié)果穩(wěn)定可靠

    可提供英文報(bào)告，用于文章發(fā)表

    實(shí)驗(yàn)周期短，價(jià)格優(yōu)惠，售后服務(wù)完善

    項(xiàng)目案例

    STR鑒定應(yīng)用

    STR分析已廣泛應(yīng)用于遺傳制圖、連鎖性分析、親子鑒定、疾病基因定位和物種多態(tài)性研究等諸多領(lǐng)域。高度多態(tài)的微衛(wèi)星還可以用來在人群進(jìn)行個(gè)體識別。刑事案件的偵破離不開法醫(yī)學(xué)的幫助,其中Y-STR檢測手段在鑒定中發(fā)揮的作用尤為突出。

    Y-STR檢驗(yàn)是法醫(yī)學(xué)對精子的一種DNA檢測手段，Y-STR基因座是位于男性Y染色體上的人類多態(tài)性STR位點(diǎn)，一般情況下，只有男性個(gè)體才有Y染色體，因此，Y-S T R具有男性遺傳，男性特異性的特點(diǎn)。Y-S T R即可作為性別鑒定的依據(jù)，同時(shí)在法醫(yī)學(xué)精斑及混合斑檢驗(yàn)中發(fā)揮著重要作用。Y染色體為男性個(gè)體特有且呈現(xiàn)男性伴性遺傳,Y-STR檢測技術(shù)可以對嫌疑人或被害人的身份認(rèn)定進(jìn)行有效確認(rèn),故作為一種補(bǔ)充檢驗(yàn)技術(shù),此項(xiàng)技術(shù)在個(gè)體識別、親子鑒定、血緣關(guān)系鑒定及族譜DNA分析等方面具有十分重要的研究和應(yīng)用價(jià)值。