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儲存條件 4℃保存，一年有效（避免冷凍）。

產品介紹 

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 是一種非 常高效的新型轉染試劑，細胞毒性更低，轉染效果更佳，達到了國際最主流轉染試劑的轉染效果。適用于把質粒、 siRNA 或其它形式的核酸包括 DNA、RNA、寡核苷酸轉染 到真核細胞中。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 對于常見的 哺乳動物細胞具有非常高的轉染效率、重復性好、操作簡單、 無明顯的細胞毒性，并且對于貼壁細胞和懸浮細胞都適用。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉染試劑的 使用方法和常用的 Lipofectamine?2000 Reagent 完全一致， 轉染效率比 Lipofectamine? 2000 Reagent 更高。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉染試劑不 僅適用于質粒、siRNA 等單一成分的細胞轉染，也適合多個 質粒或者質粒與 siRNA 等的組合轉染。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉染試劑轉 染過表達質粒后，通常 24-48 h 后達到較高的蛋白表達水平， 并且很多情況下蛋白表達量在轉染后 48 h 顯著高于轉染后 24 h；轉染 siRNA 通常 3-5 天后對于目的基因的下調水平會 比較理想。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉染試劑轉 染細胞時，基本不受細胞培養液中血清影響，即可以在血清存在的情況下進行細胞轉染。但為了取得最佳的轉染效果， 推薦轉染時使用不含抗生素培養液。轉染后不必去除轉染液， 或者改變或添加培養基，但轉染 4-6 h 后可去除轉染液。

使用方法

     1. DNA 轉染 下列步驟適用于 24 孔板培養的哺乳動物細胞，至于其 他培養材料，請參考轉染規模調整，所有數量和體積均是按孔計算。大部分細胞系所使用的 DNA（μg）與 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent（μL）的比值為 1: 2 到 1: 3， 轉染高密度細胞可獲得高轉染效率、高表達水平和低細胞毒 性。優化轉染是必需的（見優化質粒 DNA 轉染）。 

A. 貼壁細胞：轉染前一天每孔 0.5-2×105個細胞接種于 500 μL 不含抗生素的培養基中，在轉染時細胞可長至 70-90%匯合度。

懸浮細胞：在配制轉染液前每孔 4-8×105 個細胞接種于 500 μL 不含抗生素的培養基中。 

B. 轉染液制備，每孔細胞用量如下：

     a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培養基（或者其他無血 清培基） 稀釋質粒 DNA，輕輕混勻。 

     b. 使用前輕輕搖勻 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent ， 然 后 取 適 量 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 在 50 μL Opti-MEM 培養基中稀釋，室溫孵育 5 min。 注意：請在 25 min 內進行下一步操作。 

     c. 將前兩步所稀釋的 DNA 和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 混合（使總體積為 100 μL），輕輕混勻， 室溫放置 20 min（溶液可出現濁）。

     注意：轉染復合物常溫下可在 6 h 內保持穩定。

C. 在每孔細胞中加入 100 μL 轉染液，輕輕搖勻。 

D. 37℃培養 18-48 h 后檢測基因表達，轉染 4-6 h 后可更換 培養基。 對于穩定轉染，在轉染 24 h 后以 1: 10 稀釋接種于新鮮培養基中，第二天可加入選擇培養基。

優化 DNA 轉染 

     可通過改變細胞密度、質粒 DNA 密度和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 濃度以優化轉染。要保證細胞融合 在 90% 以 上 ， DNA (μg): LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent (μL)可在 1: 0.5 到 1: 5 之間進行調整。

2. RNAi 或 siRNA 轉染 

     下列步驟適用于 24 孔板培養的哺乳動物細胞，至于其 他培養材料，請參考轉染規模調整，所有數量和體積均是按 每孔計算。

A. 轉染前一日，將細胞接種于 500 μL 不含抗生素的培養基 中，使其在轉染時長至 30-50%匯合度。 

B. 轉染液制備，每孔細胞用量如下：

     a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培養基（或者其他無血 清基）稀釋 20 pmol siRNA（轉染時 siRNA 終濃度為 33 nM）， 輕輕混勻。

     b. 使用前輕輕搖勻 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent ， 然 后 取 1 μL LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 在 50 μL Opti-ME I 培養基中稀釋，室溫孵育 5 min。 

     注意：請在 25 min 內進行下一步操作。 

     c. 將前兩步所稀釋的 RNA 和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 混合（使總體積為 100 μL），輕輕混勻， 室溫放置 20 min（溶液可出現渾濁）。

C. 在每孔細胞中加入 100 μL 轉染液，輕輕搖勻。37℃培養 24-96 h 后檢測基因表達，轉染 4-6 h 后可更換培養基。 

siRNA 轉染優化

     可 調 整 siRNA 與 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 的用量以優化轉染，在 24 孔板，siRNA 可在 10-50pmol 之間調整，LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 可在 0.5-1.5 μL 之間調整，在增加細胞密度時也應優化轉染 劑量。

轉染規模調整 

不同培養材料轉染液、細胞和培養基的用量按照培養 材料面積換算。在 96 孔板細胞高通量自動分析系統，推薦 每孔使用 50 μL 轉染液。

注意：在 96 孔板，可將細胞直接接種于轉染液中以實 現快速轉染，直接在培養板中配制轉染液 100μL，直接將細胞加入培養板中，其密度為上述方法的 2 倍，細胞在轉染液中可正常貼壁。

注意事項

1. 使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉染效率。 

2. 轉染前細胞必須處于良好的生長狀態。 

3. 需自備不含抗生素的無血清培養液或 Opti-MEM?培養 液或普通的 DMEM 培養液。

4. LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉染試劑不能 vortex 或離心，宜緩慢晃動混勻。 

5. LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉染試劑使用 后請立即蓋好蓋子，避免長時間暴露在空氣中，影響轉染效 率。

6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。